檸檬酸鈉緩沖液0. 01mol/L,pH6.0是一種常用的抗原修復液,可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復。可以有效去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而改善免疫染色效果。
通常石蠟切片都需進行抗原修復處理,而冰凍切片可以不進行抗原修復處理??乖迯涂梢蕴岣呤炃衅拿庖呷旧Ч嗫梢圆煌潭鹊奶岣弑鶅銮衅娜旧Ч?。當冰凍切片免疫染色效果不理想時,考慮進行抗原修復。
按照每個片子需要10ml抗原修復液計算,1L抗原修復液可以用于100個樣本的抗原修復。
檸檬酸鈉緩沖液的使用方法:
本產(chǎn)品是干粉形式,使用前用去離子水或蒸餾水按產(chǎn)品規(guī)格溶解至1L或2L,即可使用。
1、對于石蠟切片:
①脫蠟:二甲苯3次,每次3-5min→無水乙醇2次,每次3-5min→95%乙醇1次,3-5min→90%乙醇1次,3-5min→75%乙醇1次,3-5min→蒸餾水洗2次,每次3-5min。
②抗原修復:將切片浸泡在檸檬酸修復液中,95-100℃加熱約15min。檸檬酸修復液使用前需預(yù)熱到95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋,也可以使用微波爐加熱。如果使用微波爐加熱,需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在20-30min內(nèi)冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌1-2次,每次3-5 min。隨后即可進行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。
2、對于冰凍切片:
用免疫染色洗滌液洗滌切片5min。將切片浸泡在檸檬酸修復液中,95-100℃加熱約15min。檸檬酸修復液使用前需預(yù)熱到95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋,也可以使用微波爐加熱。如果使用微波爐加熱,需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在20-30min內(nèi)冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌1-2次,每次3-5min。隨后即可進行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。
3、對于其它樣品的抗原修復,可以參考石蠟切片或冰凍切片的步驟進行。